关于多功能酶标仪应用的培训通知
发布时间: 2014-05-20 浏览次数: 491

    间:2014.5.21(星期三)9:00-11:30

    点:中国药科大学玄武门校区1214室
实验内容简介:
三个实验的简单介绍:
1、AlphaScreen:
AlphaScreen assay是由PerkinElmer Inc.所发展的实验技术,应用广泛且拥有众多优点,特别是在高通量药物筛检方面。
AlphaScreen原理:AlphaScreen其实是一种Amplified Luminscent Proximity Homogeneous Assay,主要含有两种Beads,一为Doner另一为Acceptor,当Donor Beads所带有的A分子与Acceptor Beads所带有的B分子距离非常接近时,可以使用680nm激发光去引发其表面所带有的光敏感物质(Photosensitizer),使其催化周遭的氧分子形成活化态,产生效率可达每秒60000个氧分子活化态产生,借此将讯号放大,此活化态氧分子再于邻近的Acceptor Beads上之thioxene compounds产生化学冷光反应,产生冷光效应(波长大约370nm),此冷光并进一步借由能量转换激发让Acceptor Bead 产生520-620nm的发散光荧光讯号,由于氧分子活化态非常不稳定,此反应相当快速仅4us,加上若此二种Beads距离超过200nm,反应随之下降,意味所有反应势必为AB分子结合所导致。
在实际应用上,AlphaScreen assay目前有针对GPCR药物筛选,激酶分析试验(Kinase Assay)、蛋白质交互作用(Protein-Protein interaction)等相关试剂盒。
 
2、细胞能量代谢分析:OCR(胞内、胞外耗氧速率)和ECAR(胞外酸化率)测定
糖酵解和线粒体呼吸是细胞中两种主要的产能途径。
糖酵解是指在氧气不足条件下,葡萄糖或糖原分解为丙酮酸或乳酸的过程,此过程中伴有少量ATP的生成。这一过程是在细胞质中进行,不需要氧气,每一反应步骤基本都由特异的酶催化。在缺氧条件下丙酮酸则可在乳酸脱氢酶的催化下,接受磷酸丙糖脱下的氢,被还原为乳酸。从而引起细胞外pH值的降低,引起胞外酸化。我们用胞外酸化率(ECAR)这一指标表征细胞中糖酵解作用。
氧化磷酸化:是指在有氧条件下的糖的氧化分解。在有氧的情况下,糖酵解途径中的丙酮酸可进一步氧化分解生成乙酰CoA进入三羧酸循环,生成CO2和H2O,这个过程伴随着氧的大量消耗和ATP的产生我们用氧耗率(OCR)来表征细胞中的氧化磷酸化作用。
 OCR:用Luxcel公司提供的MitoXpress探针,配合BMG公司的POLARstar Omega ACU细胞代谢平台检测细胞中的氧化磷酸化作用;
ECAR:用Lucel公司提供的pH-Xtra探针,配合BMG公司的POLARstar Omega ACU细胞代谢平台检测细胞中的糖酵解作用。